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15003865887 15038257928凝膠過濾層析中和凝膠電泳中的分子篩效應(yīng)有什么不同
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2021-07-30
凝膠過濾層析中和凝膠電泳中的分子篩效應(yīng)有什么不同
凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析。是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進(jìn)行分離。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質(zhì)，小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部，流下時(shí)路程較長，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部，下來的路程短，當(dāng)一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時(shí)，溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開了。
而在聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）中，蛋白質(zhì)的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素。進(jìn)入分離膠后，由于聚丙烯酰胺的分子篩作用，小分子的蛋白質(zhì)可以容易的通過凝膠孔徑，阻力小，遷移速度快；大分子蛋白質(zhì)則受到較大的阻力而被滯后，這樣蛋白質(zhì)在電泳過程中就會(huì)根據(jù)其各自分子量的大小而被分離。整塊膠板相當(dāng)于一個(gè)分子篩。
分子篩的第一個(gè)作用是晶體的外表面吸附多種吸附物。對(duì)于分子篩的研究表明，其外表面提供了一個(gè)精確的被吸附的分子尺寸。如果被吸附物的分子超過該尺寸，就不能進(jìn)入晶體內(nèi)部，只能被吸附在外表面。表面吸附作用(也發(fā)生在非結(jié)晶體的表面，如硅膠)，這是很弱的，而在晶體內(nèi)部有成千上萬的晶體空隙和槽，進(jìn)一步吸附分子。分子篩由硅、鋁和氧原子組成。這些分子的離子電荷在穩(wěn)定的晶體中加起來的總和應(yīng)是零。為平衡正負(fù)負(fù)荷，加入鉀、鈉、鈣等正電荷離子。帶有正負(fù)離子的巨大的面被稱做吸附場。
在吸附物與被吸附物之間有很強(qiáng)的吸引力，需要很大能量的(一般是熱能)才能消除吸引力，還原成篩子。隨著被吸附物的濃度增加，密度電荷場增強(qiáng)以至于幾乎沒有幾層被吸附分子存在。最終，被吸附物接近滿負(fù)荷，孔被填滿，類似于毛細(xì)管冷凝。如果水和苯(比如)分子都進(jìn)入13X晶體，都有同樣的機(jī)會(huì)找到電荷場，吸附到晶體中，因?yàn)閮蓚�(gè)分子都具有極性。
可是，有些分子像氮?dú)狻鍤庖驗(yàn)闆]有明顯的極性，他們可能很弱地吸附在晶體上，當(dāng)大量的極性分子涌入時(shí)被輕易地替換掉。在分子篩的吸附過程中，熱能源釋放到周圍。